[자연과학] 생화학 실험 - Western Blot 실험 결과
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작성일 23-01-14 18:08
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설명
[자연과학] 생화학 실험 - Western Blot 실험 결과
순서
[자연과학] 생화학 실험 - Western Blot 실험 결과
Western Blot 實驗 결과
-實驗 title(제목) : Western blot
-實驗날짜 :
-實驗 목적
: 단백질을 크기별로 분리하는 기술로 항원-항체 反應을 이용하여 전체 단백질에서 특정 단백질만을 Detection 할 수 있따
이번 Western Blotting은 뉴런으로 분화하기 전인 Neuroblastoma(Ne,신경모세포)를 사용해 신경모세포가 암이 되게 유발하는 단백질을 찾을 수 있따
-實驗 방법
1) Sampling (Protein Extraction)
추출해 낼 세포에 Lysis buffer를 넣고 4도씨에서 원심 분리를 한다.
-`Sample①Ne ②Ne+RA(Retinoic Acid, 분화제) ③NE+Benzo[α]Pypene 0.1ml ④NE+Benzo[α]Pypene 0.3ml ⑤NE+Benzo[α]Pypene 1ml ⑥NE+Benzo[α]Pypene 3ml
(SDS와 Tris가 단백질의 이황화 구조를 끊거나 3차 구조를 풀어 실처럼 만들고 모든 아미노산의 전하를 (-)로 바꿔 동일하게 만든다.)
inner membrane과 outer membrane을 준비해 캐스터에 끼운 후 membrane 사이에 증류수를 넣어 물질이 새는지 시간을 두고 observe한 뒤 새지 않으면 증류수는 버린다.
50ml 튜브에 폴리아크릴아마이드 3.4ml, TDS와 SDS를 합하여 2.5ml, D.W 4.1ml를 넣고 혼합한 뒤 membrane 사이에 넣어준다.
2) SDS-PAGE (sodium dodecyl sulfate - poly acrylamid gel elextrophoresis)
E-tube에 각각의 Sample 32㎕, 프루프 버퍼 8㎕ (SDS, Tris)를 넣는다.)
E-tube에 캡을 씌운 후 동동이에 띄워서…(투비컨티뉴드 )
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다.
Gel을 굳힐 때는 10% AP(Ammonium Persulfate와 TEMED를 사용한다.
(Lysis buffer는 세포막을 파괴하는 역할을 한다.
